3. 仪器设置 所有仪器的操作都基本一致。设置的时候包括反应板设置(plate setup)和程序设置(program setup)。我们以 ABI StepOne为例,详细看一下反应设置: A. 首先是实验目的选择:定量还是其他。我们命名为“BioTeke”,进行“定量”实验。 B. 实验方法的选择:我们选用的比较Ct的SYBR Green方法, Fast程序,以cDNA为模板进行。 C. 目的基因的设置:有几个目的基因和目的基因的名称。 D. 样品的设置:包括哪个是实验组,哪个是对照组。以及负对照的设置和生物重复的设置。 E. 对照组和内参基因的设置:这个是为后面的定量做准备 F. 反应程序的设置:PCR反应程序的设置要根据不同公司的MasterMix。比如BioTeke的95℃ 2分钟就可以激活DNA聚合酶(ABI的需要10 分钟)。循环反应是95℃15秒,60℃15秒的40个循环。溶解曲线程序采用仪器默认设置就可以。或者是仪器说明书上建议的程序。 G. 反应体系的设置: