关键词: MTT 材料
来源: 丁香园
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实验所需材料1.MTT 溶液的配制通常 MTT 配成的终浓度为 5 mg/ml, 须用 PBS 或生理盐水做溶剂市面上一般 MTT 的包装为 100 mg,250 mg 或 1 g1.1 对于 100 mg 这样的小包装,厂家都是将 MTT 放入小管中的,个人建议不要再用天平称量分装,而应该一次性将其全配制成溶液,如 100 mg 用 20 ml PBS 来溶解。具休做法:预先在 50 ml 离心管(没有的话,可用培养瓶替代)加入 20 ml PBS,从中先吸取 500-1000ul PBS 装入含 MTT 的小管中,吹打若干次后将其移入 50 ml 离心管,然后再混匀。可以重复几次,以使小管中的 MTT 不残留于管内。将 MTT 完全混匀后,用 0.22μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌,分装避光 (避光袋或是黑纸、锡箔纸包住) 可长期保存于-20 度。按细胞培养板每孔需加 10ul 计算,一般每 96 孔板约需 1 ml,所以分装时可考虑每管分装 1 ml。1.2 对于大包装,可按上述方法称取一部分溶解,也有人将粉剂分装在 EP 管里,用的时候现配,直接往培养板中加。注意事项:(1) 在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。(2) 配成的 MTT 需要无菌,MTT 对菌很敏感(3)MTT 一般最好现用现配,过滤后 4 度避光保存两周内(个人曾做过 4 度避光保存 4 周的 MTT 溶液,效果仍然不错)有效,或配制成 5 mg/ml 保存在-20 度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当 MTT 变为灰绿色时就绝对不能再用。(4)MTT 有致癌性,用的时候小心, 有条件最好带那种透明的簿膜手套.2.MTT 甲瓒溶解液2.1 二甲基亚砜 DMSO,可以直接溶解,无需配制,使用方便,溶解速度快,但对人体毒性较大,且需去除原培养液,在去除培养液的过程中,可能会把结晶去掉,导致结果不稳定。2.2 三联溶解液:SDS10 g,异丁醇 5 ml,10M HCl 0.1 ml 用双蒸水溶解配成 100 ml 溶液(文献方法:周建军等,评价抗癌物质活性的改良 MTT 方法,中国医药工业杂志,1993,24(10):455-457),该溶解液不需去除原培养基,但溶解较慢。(个人觉得其溶解的能力不如 DMSO 强)该溶解液因含有 SDS,在低温保存的时候易产生结晶,因此在用之前必须提前几小时拿至室温,将 SDS 结晶全部溶解后再使用。
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你所在的学校的补助在全国是什么水平?
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
小伙伴们,请问你们的女(男)朋友是怎么找到的?(好给后来的朋友参考啊)是交友网站,还是七大姑八大姨介绍,还是同学自然成事?春天到了,我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧!
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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