标签: 大肠杆菌 感受态细胞 制备
大肠杆菌感受态细胞的制备可应用于基因工程研究。
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带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质粒DNA,该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl 等化学试剂)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,能容许外源DNA 的载体分子通过。
第一次离心后出现黑色物体,后面连续做了两次,都有,不知道是哪个环节出现了问题,严格的无菌操作
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大肠杆菌感受态细胞制备时的CaCl2浓度到底是多少呢?
感受态细胞制备时的CaCl2浓度,有说是0.1mol/L,比如《分子克隆》。有说是0.05mol/L。到底哪个好?实验室只有CaCl2·2H2O,没有无水CaCl2,可不可行?
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感受态制备过程中,如何将第一次离心后的菌体悬浮?
其他的步骤没问题。问题是如何将第一次离心后的菌体悬浮?书上说不能剧烈振荡,否则影响转化的效率。可是不剧烈的话,无法将菌体悬浮,怎么办?
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