HeLa 细胞(培养和保存条件见下文。我们也成功地使用过 CellexBiosciences 公司制备并冷冻的 HeLa 细胞)
甘油
液氮
MgCl2·6 H2O
硫酸铵
试剂
磷酸缓冲盐溶液(PBS)
缓冲液 G
缓冲液 H
缓冲液 D
TM 缓冲液+0.1 ml/L KCl
(配方,见"试剂的配制",PP.131~138)
操作程序
HeLa 细胞的培养与保存(12-L 规模)
1)HeLa 细胞对数生长至密度为 5X105 个细胞/ml, 温和收集细狍以免裂解。
2) 细胞用 PBS 洗涤一次,并再次收集。
3) 对每升原始培养液所得之细胞加 2 ml 缓冲液 G(即,对由 12L 培养液得到的细胞加 24 ml 缓冲液,再补加甘油至甘油的终浓度为 20%(v/v)。例如,由 12L 培养液可得大约 18 ml 体积的细胞,加入 24 ml 缓冲液 G 后,总体积达 42 ml。但因细胞占了一定体积而使甘油浓度仅为 17.1%,故必须再补加 1.5 ml 甘油,使甘油的终浓度达 20%。