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TeloTAGGG™ 端粒长度
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TeloTAGGG™ Telomere Length Assay
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嵘崴达
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别名:telomere
该试剂盒对末端限制性片段(TRF)进行Southern分析,这些片段是利用频繁切割限制性内切酶消化基因组DNA而获得的。第1步:基因组DNA的消化使用优化的频繁切割限制性内切酶混合物消化纯化的基因组DNA。选择的酶不会切割端粒DNA和亚端粒DNA。这是因为重复序列具有特殊序列特征。非端粒DNA被消化成低分子量片段。第2步:凝胶电泳和Southern印迹在DNA消化后,通过凝胶电泳分离DNA片段,然后通过Southern印迹将其转印至尼龙膜上。第3步:杂交和化学发光检测转印的DNA片段与端粒重复序列的特异性di高辛(DIG)标记探针杂交,然后使用与碱性磷酸酶共价连接的DIG特异性抗体孵育。最后,使用碱性磷酸酶的高灵敏度化学发光底物CDP-Star,使固定的端粒探针显色。通过对比信号与分子量标准品,可确定平均TRF长度。端粒是位于真核细胞染色体末端的特殊DNA蛋白结构,由小串联重复DNA序列组成。已有许多端粒序列经过鉴定,显示其具有非常少的序列变异,甚至是在系统发育存在差异的生物体之间,如四膜虫(序列:TTGGGG)和人类(序列:TTAGGG)。由于DNA聚合酶不能复制线性DNA的末端,因此,有人认为每个复制周期都会导致染色体末端逐渐缩短(称为“末端复制问题”)。已在体外和体内经过证实的这种现象,似乎与正常体细胞的有限增殖能力(“有丝分裂钟”)有关。由于生殖细胞、干细胞和肿瘤细胞都表现出具有延长甚至无限的寿命,因此有人提出这些细胞必须具有维持端粒长度的特定机制。保持稳定的端粒长度与端粒酶的激活有关。该酶是一种核糖核蛋白,利用其内在RNA组分作为DNA合成的模板,通过在染色体末端添加重复序列来补偿端粒DNA的丢失。端粒通过与结构蛋白发生特异性结合,对维持真核细胞内染色体的稳定性具有重要作用。这些蛋白质可以封闭线性染色体的末端,防止核降解、染色体末端融合、不规则重组以及其他通常对细胞致命的事件。对人类外周血单核细胞研究样本中端粒长度的分析揭示了端粒长度随供体年龄的增加而降低,反映了这些细胞的复制史。已在多种疾病(如,唐氏综合征、共济失调性毛细血管扩张和HIV感染)中发现存在端粒丢失加速的现象,表明端粒长度缩短可能与这些疾病相关的免疫功能障碍有关。该试剂盒用于进一步了解关于这些关系的科学知识。分析时间:约18小时样品材料:细胞培养物和其他生物样品用于测定端粒长度的非放射性化学发光检测法。
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